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HACCP미생물배지/실험도구/소모품

3M페트리필름 / 효모곰팡이(YM)검사배지

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3M™ Petrifilm™ Rapid Coliform Count Plate(속성대장균군)은 검체 중에 대장균군을 좀 더 신속하게 검출하고자 할 때 사용하는 건조필름 배지이다. 검출원리는 대장균군용 페트리필름과 거의 같으나 대장균이 생성하는 산의 검출속도를 높여 검사하는 방법이다. 미국이나 유럽에서는 주로 유제품 등 유통기한이 짧은 제품의 검사에 응용하고 있다.

페트리필름 Series 2000 속성 대장균군 측정용 배지를 이용하여 대장균군에 관한 많은 정보를 쉽게 얻을 수 있다. 대장균군은 유당(lactose)을 발효하여 산(acid)과 가스를 생산한다. 배양지내의 pH 지시약이 배양지상의 모든 균체를 변화시키며, 상부필름이 대장균군에 의하여 생산된 CO₂가스를 포집하여 배지상에 가스 방울이 나타난다.

추정 대장균군 균체수 실험 (6~14시간)

추정 대장균군 균체수는 균체를 가지거나, 가지지 않는 배양지의 배경색과 구별되는 노란지역으로써 배양 6시간후부터는 나타나게 된다.(그림1의 원 1,2)

계속되는 추정 대장균군의 성장을 관찰하기 위하여 6시간 판독후에 배양지를 14시간까지 배양한다.

확정 대장균군 균체 측정 (8~24시간)

확정 대장균군 균체는 배양후 8시간부터 나타나기 시작한다. 형태는 가스방울과 연결된 균체로써 보인다. 원1을 보라.

결과 판독후 추가적인 확정 대장균군의 성장을 발견하기 위하여 24시간까지 배양을 계속한다.

가스방울과 연관되어 있지 않은 균체는 세지 말것! (그림2의 원2)

[그림 3] 에서 10까지의 gel 의 색변화를 주목할 것!
대장균군이 산을 생산함에 따라 gel의 색이 붉은 주황색에서 노란 주황색으로 변한다.

많은수의 대장균군(>1000cfu/plate)는 배양 4시간후에 전체 생장지역을 노랗게 변화시킨다. (그림4). 이런 경우에 정확한 결과를 위해 더 높은 희석이 요구된다.

페트리필름 Series 2000의 생장지역은20㎠ 이다. 균체수가 많은 경우 격자 1칸(1㎠)내의 균체수를 측정후 20배를 해주면 전체균체수가 된다. (그림 5)

대장균군의 성장이 계속됨에 따라 산생성지역 내에서 붉은 균체가 나타나기 시작한다. (그림 6) 가스방울이 없으면 추정 대장균군으로 간주한다.

페트리필름 Series 2000에서의 세균성장의 초기해석은 세균의 대사상태와 그들의 농도에 기인한다.

그림 7,8 은 같은 배양시간동안 다른 농도의 미생물을 접종한 후 배양시킨 결과이다. 이 시간에 양쪽의 배지상에 나타나는 산생성지역을 가진 빨간 균체가 나타난다.

균체1개 정도의 지름길이만큼 떨어져서 가스방울이 존재하거나 균체주의에 링(ring) 형태로 균체주위를 감싸고 있는 경우 균체를 확정 대장균군으로 측정한다. 그림 7의 원 1,2를 각각 확인할 것. 그림 8에서 가스방울의 크기와 균체에 대한 근접도를 주목하라. 그림 8의 미생물들은 그림 7의 미생물보다 먼저 유당을 발효했다는 것을 알 수 있다.

많은수의 대장균군은 생산되는 산의 양을 증가시킨다.
산생성지역의 확산은 대장균군이 계속 성장하여 산을 생산함에 따라 발생한다. 가스방울과 관련되어 있는 균체만을 확정 대장균군으로써 측정해야 한다. 그림 9를 보라. 고농도의 당을 포함하는 식품은 가스를 생산하는 비대장균군 Enterobacteria를 대장균으로 오인할 가능성을 제공할 수 있다.

페트리필름 Series 2000에서의 TNTC는 다음의 특징중 한가지 이상을 따른다.
1) 붉은 오렌지에서 노란 오렌지로의 gel의 색 변화
2) 무수한 작은 균체들
3) 많은 가스 방울

[그림 12]의 페트리필름 Series 2000 상의 결과는 다음의 두가지 특징에 의하여 TNTC 로써 해석한다.
1) gel의 색 변화
2) 무수한 작은 균체들

그림 13에서 각각의 균체는 보이지 않지만 gel 색이 노란색이고, 가스방울이 많으므로 TNTC.

그림 14는 무수한 수의 그램음성의 비대장균군이 존재하는 경우이다. 유당을 발효하지 못하는 많은 수의 미생물이 존재하는 경우는 gel이 검붉은색으로 변한다.

pH	대부분의 세균은 pH 7.0 (중성) 근처에서 최적생장을 보인다. 낮은 pH의 제품은 희석을 통하여 6.6~7.2 사이로 pH를 조절한 후 페트리필름에 접종한다.
그림 15, 16은 pH조절후 요구르트를 접종한 예이다. 배지내의 저해제가 gram positive 균의 생장을 방해하지만 균에의해 생성되는 acid가 gel 색을 붉은 오렌지에서 노란 오렌지로 변화시킨다.

균체도 보이지 않고 가스방울도 보이지 않으므로 음성!

gel 색의 변화에도 불구하고 이것은 요구르트내의 유산균에 의한 결과이다.

제품 식품입자가 때로 불규칙한 형태로 존재하나 gas 방울과 연결되어 있지 않다.

그림 17은 paprita의 희석액을 초기에 본것이다. 원 1은 식품입자 주위의 산생성지역을 나타낸다. 어떤 식품입자는 pH 지시약이나 반응한 산성입자를 포함한다. 원 2는 산생성지역은 아니지만 붉은색 입자 주위의 방울을 나타낸다. 대장균군을 확인하기 위하여 산과 가스를 확인하라.

쵸콜렛의 희석액이 그림 18에 나타냈다. 때때로 가스를 균체를 파괴하여 균체가 방울의 외각에 걸치게 되는 경우가 있다. 방울 주위의 산생성이 다른 지시가 된다.

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